Sterilizasyonhücre biyolojisi ve biyomedikal deneylerin temel taşıdır. Çoğu biyomedikal laboratuvar, sterilize edilmiş laboratuvar aletleri olmadan canlı hücrelerin kültürlenmesini içeren herhangi bir çalışmayı gerçekleştiremez. Birçok laboratuvarın sterilite ile resmi olmayan bir ilişkisi olsa da, steril laboratuvar aletlerine sahip olmanın etkisini hafife almak son derece nadirdir. Bununla birlikte, sterilizasyon da, tıpkı cam eşyaların temizlenmesi gibi, giriş seviyesi laboratuvar personeli için sıklıkla önemli bir görev olarak görülüyor.
Zayıf bir alet sterilizasyon işlemi, sterilizasyon tesislerinin tamamen yokluğundan daha büyük mali kayıplara neden olabilir. Laboratuvarlar kötü sterilize edilmiş ekipmanlar kullandığında deneyler kolayca kontamine olabilir ve kullanılamayan veya anormal sonuçlar nedeniyle kayıplara neden olabilir. Bazı durumlarda, kirlenmiş ekipman diğer cihazları veya donanımı kirletebilir ve laboratuvarın izole edilmesi ve düzeltilmesi zor olabilecek çok sayıda deneysel arıza yaşamasına neden olabilir. Yetersiz sterilizasyondan kaynaklanan bu tuzaklardan kaçınmak, sterilitenin gözlemlenmesine yönelik titiz ve sonuç odaklı bir yaklaşım gerektirir; bu, birçok laboratuvarın benimsemekten faydalanabileceği bir uygulamadır.
Hangi aletlerin sterilize edilmesi gerekiyor?
Sterilizasyon, hücre kültürü çalışması yapan herhangi bir laboratuvar için son derece önemlidir; o kadar ki, hücre kültürüyle ilgili tüm laboratuvar cihazlarının sterilize edilmesi gerektiğini söylemek abartı olmaz. Çoğu laboratuvarda çok fazla donanım bulunur ve hücre kültürü yapsalar bile hücre kültürü çalışmasına doğrudan dahil olmazlar. Daha da önemlisi, laboratuvarın sterilizasyon maliyetini karşılayabileceği varsayılarak, hücre kültüründe yer almayan ekipmanlar bile sterilizasyondan yararlanabilir.
Örneğin, rutin olarak genetik dizileme veya PCR gerçekleştiren laboratuvarlar, moleküler biyoloji çalışmalarını gerçekleştirmek için gerekli olan pipetleri ve termal döngüleyicileri sterilize etmeyi ekonomik açıdan zor bulabilirler. Bu cihazlar hücre kültürüne dahil olmadığından, tamamen steril olmamanın sonuçları minimum düzeydedir - ya da mantık böyledir. Daha da önemlisi, bu mantık yanlıştır.
Bu cihazlardaki biyolojik kontaminasyonun, çok pahalı hücre kültürü deneylerinin yanlış mikroorganizmalara maruz kaldıktan sonra ölmesine neden olmayacağı doğru olsa da, ex vivo deneyler bile biyolojik materyallere yanlış maruz kalma nedeniyle sonuçlarının bozulmasına neden olabilir.
Sterilizasyon, herhangi bir biyolojik materyale doğrudan maruz kalmamış laboratuvar donanımları için bile önemli bir önlemdir. Örneğin bir laboratuvar, biyogüvenlik kabininin içini dezenfekte ederek deneyleri için çalışma alanının bir kontaminasyon kaynağı haline gelmemesini sağlayabilir. Benzer şekilde, cam eşyaların sterilize edilmesi, sonuçları bozma korkusu olmadan hassas deneylerin yanında kullanılmasını sağlar.
Bununla birlikte, tüm laboratuvarların fayda sağlayabilecek her şeyi sterilize edecek fonları yoktur. Sterilizasyon genellikle pahalı olduğundan çoğu laboratuvar, hücre kültürü alanından uzaktaki diğer aletlerin sterilize edilmemiş kalmasına izin verirken, kritik ekipmanların sterilizasyonuna öncelik verir. Bu nedenle, sterilizasyon kaynaklarının kataloglanması laboratuvar çalışanları için iyi bir alışkanlıktır; çünkü sterilizasyon olmadan kullanılamayan donanım, laboratuvardaki diğer ekipmanların çoğu sırayla sterilize edilmezse pek işe yaramaz.
Alet sterilizasyonu sırasında laboratuvarların neye ihtiyacı vardır?
Sterilizasyon prosesinin, her biri laboratuvarda farklı miktarda alan gerektiren birkaç farklı aşaması vardır. Sterilizasyon sürecinin mekânsal karmaşıklığı, laboratuvarın araştırma, klinik çalışma veya üretim yürütmesine bağlıdır. Üretim ve klinik çalışmalar, araştırma çalışmalarına göre daha yüksek sterilite standartlarına sahiptir, dolayısıyla sterilizasyon alanlarının ayrımı ve karmaşıklığı daha belirgindir. Kısaca sterilizasyon işlemi için gerekli olan üç alan şunlardır:
dekontaminasyon alanı
paketleme alanı
Sterilizasyon alanı
Her alanın farklı bir amacı vardır ve sterilizasyon işleminin aşamasına karşılık gelen barınmadan sorumludur. Dekontaminasyon bölgesi, steril olmayan su veya temizlik kimyasalları ile temizleme gibi kaba yöntemler kullanılarak mümkün olduğunca fazla kirletici maddenin uzaklaştırıldığı, sterilitenin temelinin oluşturulduğu yerdir.
Dekontaminasyon genellikle karmaşık bir olay olduğundan çoğu laboratuvar, ana laboratuvar çalışma alanının dışında bir dekontaminasyon alanına sahip olmayı tercih eder. Dekontaminasyonun amacı, sterilize edilen alet veya ekipmandaki tüm görünür kontaminasyonu ortadan kaldırmaktır. Bu, kir yığınlarından topaklaşan temizlik kimyasallarına kadar her şeyi içerebilir. Dekontaminasyon sürecinin, süreç başlamadan önce mevcut olmayan hiçbir şeyi geride bırakmaması önemlidir. Bu nedenle çoğu dekontaminasyon işlemi, ekipmanın suyla temizlenmesiyle sona erer.
Dekontaminasyondan sonra laboratuvar, dekontamine edilecek ekipmanı paketlemelidir; böylece donanımın fonksiyonel yüzeyleri sterilizatöre maruz kalabilir, ancak yeni kontaminasyona yol açabilecek dış havaya veya başka herhangi bir ortama maruz kalamaz.
Örneğin, bir varilin içini otoklavda sterilize etmek için sıcak buhar kullanmak için, varilin ağzının üstüne bir parça alüminyum folyoyu gevşek bir şekilde yerleştirerek ve yanlara bantlayarak namluyu "paketlersiniz". Yani otoklavlama sırasında Sterilizatördeki sıcak buhar kovayı sterilize ettiğinde, buhar folyonun altından akarak kovanın işlevsel yüzeyini (sıvıyı tutan iç kısım) sterilize edebilir ve ardından dışarı akabilir. Folyo namluya bantlandığı için namlunun fonksiyonel yüzeyi, namlu otoklavdan çıkarıldıktan sonra bile elementlerden korunacak ve steril kalacaktır. Ancak klinik malzemelerle çalışan veya ilaç üreten laboratuvarlar için steril paketleme standardı, basit bir alüminyum folyo kova çözümünün çok ötesine geçer.
Sterilizasyon alanı sterilizasyon işleminin kalbidir. Laboratuvarın yaklaşımına bağlı olarak sterilizasyon alanında birkaç farklı sterilizasyon yönteminden biri kullanılabilir. Bu yöntemler, standart bir laboratuvar otoklavındaki gibi sıcak buhar ve basıncı veya gama ışını ışınlaması gibi daha egzotik yöntemleri içerebilir. Çoğu laboratuvar, kendi tesislerinde mevcut olan sterilizasyon yöntemine sadık kalır; bu, çoğu zaman otoklav kullanılması anlamına gelir. Ancak farmasötik veya tıbbi cihaz üretimiyle uğraşan laboratuvarlarda ışınlama daha yaygındır.
Sterilizasyon süreci doğrulaması
Sterilizasyon işlemi tamamlandıktan sonra çoğu laboratuvar, ekipmanlarının yalnızca kısmen sterilize edilmediğini, gerçekten tamamen sterilize edildiğini doğrulamak için çeşitli yöntemlerden birine sahiptir. Bunu doğrulamanın en kolay yolu basit bir otoklav bandı kullanmaktır. Her ne kadar yalnızca otoklav bağlamında sterilizasyonun doğrulanması için uygun olsa da, otoklav bandı etkilidir çünkü tam sterilizasyon rengini garanti etmek için gereken süre boyunca sterilizasyon koşullarına maruz kaldığında değişir. Bu nedenle birçok laboratuvar sterilizasyon işlemi sırasında otoklav bandını yoğun olarak kullanmaktadır.
Daha karmaşık sterilizasyon doğrulaması, hücre kültürü deneylerini gerektirir. Tipik bir sterilizasyon doğrulama deneyinde, canlı bir bakteri kültürünün bir örneği laboratuvarda kullanılan bir sterilizasyon işleminden geçirilir ve daha sonra canlı hücreler elde etmek için kültürün kabı sürüntüyle alınır. Swaplar daha sonra birkaç gün boyunca kültürlenir ve yeni hücre kolonileri gözlemlenir. Hiçbir koloni büyümezse sterilizasyon işlemi başarılıdır.
Sterilizasyon Boru Hatlarının Sonuç Almasını Sağlama
Laboratuvarların ilgili hücre kültürü donanımını başarılı bir şekilde sterilize edebilmesi için uygun malzemelerin yerinde olması gerekir. Bir sterilizasyon işlemi için gerekli olan büyük miktardaki reaktiflerin, temizleyicilerin ve tek kullanımlık malzemelerin takibini yapmak, özellikle aseptik teknik veya steril üretim konusunda uzun bir geçmişi olmayan laboratuvarlar için zor olabilir. Otoklav bandından dekontaminasyon aşaması temizleme çözümlerine kadar her şey için deneyimli bir tedarikçiyle çalışmak, başarılı sterilizasyon ve deneyleri desteklemede önemli bir faktördür.
